Micropropagação in vitro do abacaxizeiro ‘Turiaçu’ cultivado no município de Itacoatiara-AM
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Ricardo Lopes
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Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia - INPA
Resumo
A cultura do abacaxi se destaca como a segunda em valor de produção entre as culturas temporárias no Amazonas, superada apenas pela mandioca. A variedade Turiaçu é a mais produzida e consumida no estado e a maior parte da produção é oriunda de Itacoatiara, que se destaca na 9ª posição em área cultivada e 12ª posição em volume de produção entre os municípios produtores de abacaxi no Brasil. Por outro lado, a produtividade no Amazonas está abaixo dos maiores produtores de abacaxi no Brasil. Umas das possíveis causas para baixa produtividade é a incidência de doenças, incluindo viroses. Entre as formas de controle de doenças recomenda-se o uso de mudas sadias, nesse sentido, tem destaque a produção de mudas micropropagadas in vitro. No entanto, não existem protocolos para micropropagação in vitro da variedade Turiaçu. Por este motivo, o objetivo desse estudo foi estabelecer um protocolo de micropropagação in vitro para o abacaxizeiro variedade Turiaçu cultivada no Amazonas. Experimentos utilizando gemas apicais e laterais do talo da coroa do fruto foram conduzidos para avaliação de procedimentos de assepsia e o método de micropropagação por estiolamento e multiplicação de brotos. Os explantes foram obtidos a partir de coroas de frutos comerciais da variedade Turiaçu produzidos no município de Itacoatiara, Amazonas e no cultivo in vitro utilizado o meio de cultura MS (MURASHIGE e SKOOG, 1962). Os experimentos foram realizados no Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Amazônia Ocidental. No experimento de assepsia foram avaliadas diferentes concentrações e tempos de imersão do explante em solução de hipoclorito de sódio e avaliadas contaminação, oxidação e sobrevivência dos explantes. No experimento de estabelecimento in vitro foram testadas diferentes combinações de concentrações dos reguladores de crescimento ANA e BAP e avaliado o comprimento da parte aérea após 90 dias dos explantes in vitro. No experimento de estiolamento, brotações estabelecidas de gemas axilares foram cultivadas por 90 dias em diferentes combinações de concentrações dos reguladores de crescimento BAP e ANA e na etapa de regeneração seguimentos nodais de brotos estiolados foram cultivados por 90 dias em meio com diferentes concentrações de BAP. No experimento de enraizamento in vitro brotos regenerados foram cultivados durante 45 dias com diferentes concentrações de ANA e avaliadas comprimento da parte aérea, número e comprimento de raízes e peso fresco e seco das brotações. Na aclimatação as mudas provenientes dos tratamentos com diferentes doses de ANA no enraizamento in vitro foram cultivadas em casa de vegetação e avaliadas aos 30, 60 e 90 dias para diâmetro do coleto, número de folhas, comprimento e largura da maior folha, comprimento e largura da 2ª menor folha, comprimento de raiz e teor de clorofila. De acordo com os resultados obtidos, concluiu- se: a) para assepsia de gemas apicais recomenda-se solução com 0,5% de cloro ativo e para gemas axilares com 1,25% de cloro ativo e 5 min. de imersão na solução asséptica para ambos os tipos de gema; b) para o estabelecimento in vitro recomenda- se para gemas apicais meio MS acrescido de 2,3 µM L-1 de BAP e para gemas axilares meio MS sem reguladores de crescimento; c) para o estiolamento in vitro de brotos o cultivo em meio MS sem reguladores de crescimento; d) para a multiplicação de brotos a partir de seguimentos nodais recomenda-se o cultivo em meio MS acrescido de 18,6 µM L-1 de BAP, com três subcultivos de 30 dias, condições que proporcionam taxa de multiplicação estimada em 428 brotos regenerados por explante e, e) para o enraizamento in vitro de brotos micropropagados recomenda-se o cultivo por 45 dias em meio MS sem reguladores de crescimento.
Abstract:
The pineapple crop stands out as the second in production value among temporary crops in Amazonas, surpassed only by cassava. The Turiaçu variety is the most produced and consumed in the state and most of the production comes from Itacoatiara, which ranks 9th in cultivated area and 12th in production volume among pineapple-producing municipalities in Brazil. On the other hand, productivity in Amazonas is below the largest pineapple producers in Brazil. One of the possible causes of low productivity is the incidence of diseases, including viruses. Among the forms of disease control, the use of healthy seedlings is recommended, in this sense, the production of micropropagated seedlings in vitro is highlighted. However, there are no protocols for in vitro micropropagation of the Turiaçu variety. For this reason, the objective of this study was to establish an in vitro micropropagation protocol for the Turiaçu pineapple variety grown in Amazonas. Experiments using apical and lateral buds of the fruit crown stalk were conducted to evaluate asepsis procedures and the micropropagation method by estiolation and shoot multiplication. The explants were obtained from commercial fruit crowns of the Turiaçu variety produced in the municipality of Itacoatiara, Amazonas and in vitro culture used the MS culture medium (MURASHIGE and SKOOG, 1962). The experiments were carried out at the Laboratory of Plant Tissue Culture of Embrapa Amazônia Ocidental. In the asepsis experiment, different concentrations and immersion times of the explant in sodium hypochlorite solution were evaluated and contamination, oxidation and survival of the explants were evaluated. In the in vitro establishment experiment, different combinations of concentrations of the growth regulators ANA and BAP were tested and the length of the aerial part was evaluated after 90 days of the in vitro explants. In the stiolation experiment, shoots established from axillary buds were cultivated for 90 days in different combinations of concentrations of the growth regulators BAP and ANA and in the regeneration stage nodal segments of stiolated shoots were cultivated for 90 days in medium with different concentrations of BAP. In the in vitro rooting experiment regenerated shoots were cultivated for 45 days with different concentrations of ANA and evaluated for aerial part length, number and length of roots and fresh and dry weight of shoots. In the acclimatization, the seedlings from the treatments with different doses of ANA in the in vitro rooting were grown in the greenhouse and evaluated at 30, 60 and 90 days for collar diameter, number of leaves, length and width of the largest leaf, length and width of the 2nd smallest leaf, root length and chlorophyll content. According to the results obtained, it was concluded: a) for asepsis of apical buds, a solution with 0.5% of active chlorine is recommended and for axillary buds with 1.25% of active chlorine and 5 min of immersion in the aseptic solution for both types of buds; b) for in vitro establishment, MS medium plus 2.3 µM L-1 of BAP is recommended. b) for in vitro establishment, MS medium plus 2.3 µM L- 1 of BAP is recommended for apical buds and MS medium without growth regulators is recommended for axillary buds; c) for in vitro budding, culture in MS medium without growth regulators is recommended; d) for the multiplication of shoots from nodal segments, cultivation in MS medium plus 18.6 µM L-1 of BAP is recommended, with three subcultures of 30 days, conditions that provide an estimated multiplication rate of 428 regenerated shoots per explant and, e) for the in vitro rooting of micropropagated shoots, cultivation for 45 days in MS medium without growth regulators is recommended.